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    免疫球蛋白抗血清制備方法

    點擊次數(shù):1625  更新時間:2016-09-30

    免疫球蛋白抗血清制備方法
    此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性,故多需加佐劑。
    (1)淋巴結注射法
    1)選擇體重2~3Kg的健康雄性家兔( 2只以上),編號;
    2)在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗,50mg(約0.6mL.每只足庶部皮下0.1mL,皮內0.2mL)。7~10d后,鼠或國窩處淋巴結腫大如黃豆或蠶豆大小;
    3)用二指固定腫大之淋巴結,兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原o.5mL,共1mL。事先將抗原稀釋為 5~10mg/ml,在免疫前一日加入青、鏈霉素,使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和1000mg/mL。4℃,次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個注射器分別吸取佐劑與抗原,中間用細膠管連接,相互推進若干次,達到乳化目的;
    4)10~14d后,于兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原0.25~0.5mL(這一次也可以省略);
    5)7d后,于兩側淋巴結各注射加有不*佐劑的抗原0.25~0.5mL;
    6)試血:第三次免疫后7~10d,耳靜脈取少量血,分離血清,用雙擴散法,中間孔加抗原(1mg/mL),周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清,37℃、 24h,觀察結果,效價在1︰16以上,或者中間孔加抗血清,周圍孔加不同稀釋倍數(shù)的抗原。效價達4000倍以上即可應用;
    7)放血:效價合格后即可放血。放血前停食12h。動物仰臥固定,頸部剪毛消毒,切開皮膚lOcm,找到頸動脈,將頸動脈和迷走神經(jīng)剝離。選擇血管中段,用兩止血鉗夾住(約 5cm),切開,放血(2500g重家兔可放血lOOmL);
    8)分離血清:血液放于大試管、平皿或三角瓶中,凝固后,用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離,先故37122h,再放4℃,使血清充分析出。離心沉淀,鑒定合格,冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

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